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中医药防治原发性肝癌机理研究进展 诱导肝癌细胞分化 恶性肿瘤被认为是一种细胞分化异常的疾病，但并非“一旦成为癌细胞，永远就是癌细胞”，大量研究发现，在一定条件和诱导分化剂作用下，肿瘤细胞可以被诱导分化为正常或接近正常细胞。这就为肿瘤的治疗和预防开辟了一条新的道路，肿瘤细胞诱导分化治疗已成为国际肿瘤治疗研究的一个热点。休闲 居编 辑 在诱导肿瘤细胞分化的研究中，形态学上的分化成熟是表明肿瘤细胞分化的基本标志之一。如袁淑兰等将体外培养的SMMC-7721细胞经0.5μg/ml丹参酮处理4天后，用光镜及电镜观察，发现细胞排列稀疏，大小趋向一致，细胞核质比例变小，胞质内出现分化良好的细胞器；经细胞生长测定发现细胞生长抑制率为58.1%，台盼蓝染色未见死亡细胞；流式细胞术检测发现，c-myc基因表达明显下降，而c-fos基因表达增强。因此认为丹参酮可能是通过调节SMMC-7721细胞原癌基因的表达，抑制细胞进入S期，从而抑制细胞生长和诱导细胞分化的。 另外，生化特性和生理功能也是识别细胞分化的重要指标。黄炜等观察到，1.0mmol/L和3.0mmol/L桂皮酸均有显著抑制BEL-7402细胞增殖的作用，并能使代表肝细胞分化的鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)、酪氨酸-α-酮戊二酸转氨酶(TAT)和碱性磷酸酶(ALP)比活力明显升高(P<0.05、 P<0.01)，而使肝癌细胞异常分化的标志甲胎蛋白(AFP)分泌量和γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性明显下降(P<0.05、 P<0.01)，可见桂皮酸有抑制BEL-7402细胞增殖和诱导分化其作用。 曾小莉等则从形态学和生化代谢两方面，观察了400μg/ml人参总皂甙对人肝癌细胞HepG2的诱导分化作用。发现癌细胞经处理后，在形态学上出现了向正常肝细胞方向逆转的现象，生长受到明显抑制；生化代谢上 ALP活性明显升高(P<0.01)，而AFP合成明显下降(P<0.01)；提示人参总皂甙可诱导人肝癌细胞分化。同样，张燕军等观察了苦参碱对SMMC-7721细胞的诱导分化作用，发现处理组细胞出现明显的增殖抑制，亚细胞结构趋于正常，AFP分泌量明显低于培养天数相同的对照组细胞，γ-GT活性逐日下降，TAT活性始终高于对照组细胞，处理6天后，细胞DNA含量降低，S期细胞数增加，可见，苦参碱可使SMMC-7721细胞聚集于S期，诱导其向正常肝细胞分化。 同样，中药血清药理学实验方法也被应用到诱导肿瘤细胞分化的研究中。黄育华等分别观察了富硒珍珠茶含药血清及其提取液直接添加，和叶下珠含药血清及其提取液直接添加对BEL-7402细胞诱导分化的影响，结果发现，富硒珍珠茶、叶下珠及两者含药血清都能够抑制细胞生长及克隆形成，减少细胞AFP的合成和分泌，抑制γ-GT活性，促进白蛋白(ALB)的合成和分泌，并呈一定的浓度和时间依赖关系，还可促使细胞形态向正常方向分化，从而对BEL-7402细胞起诱导分化作用。刘平等则选取临床肝癌治疗常用的益气药黄芪、白术，温阳药附子、肉桂，补肾药虫草菌丝、仙灵脾，养阴药麦冬、北沙参，分别制备含药血清作用于SMMC-7721细胞，结果发现，养阴药可显著抑制细胞增殖，余三组均无此作用；养阴药分别与其他三组药配伍后均可抑制细胞增殖，但只有益气养阴的作用显著强于养阴药；在降低细胞核浆比与AFP分泌量，提高ALB的合成、细胞内cAMP含量以及与P53蛋白、抑制P21ras蛋白表达等与其抑制增殖的结果基本一致；其中，以提高细胞内cAMP含量的作用最突出，与对照组相比，养阴药提高44.5%，益气药提高24.3%，而益气养阴组较养阴药提高60.3%，较维甲酸提高20.8%。可见，养阴药麦冬、北沙参可显著抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞分化；益气药黄芪、白术对养阴药这一作用有显著放大作用，而提高细胞内cAMP含量是其主要作用环节。王昌俊等用扶正抗癌方含药血清处理SMMC-7721细胞一定时间后，也发现细胞内cAMP明显升高，ALB分泌增多，AFP的分泌减少，癌细胞活力明显减弱，说明扶正抗癌方对人肝癌细胞具有诱导分化作用。 提高荷瘤机体的免疫功能 近些年来，大量研究发现，许多中药在抗肝癌的同时，还能增强机体抗肿瘤免疫功能，从而调动机体自身的抗癌能力，以达到抑制肿瘤增殖和转移，延长生存期的目的。 1.提高免疫细胞的免疫活性 现代研究表明，机体抗肿瘤免疫效应以免疫活性细胞为主，如NK细胞、T细胞、LAK细胞及巨噬细胞等。甲鱼多糖每天1μg/g体重口饲肝癌(B16)实体瘤正常荷瘤小鼠和免疫功能低下的荷瘤小鼠，发现其平均生存期分别为44.1±0.84天和38.5±1.19天，皆和对照组有显著性差异(P<0.01)，并可显著提高两种荷瘤小鼠NK细胞活性和T淋巴细胞转化率。同样可提高荷瘤小鼠T淋巴细胞转化能力的还有古卓良观察的白魔芋精粉，发现其还可显著增强荷肝癌(Heps)小鼠单核巨噬细胞吞噬能力，并使白魔芋精粉治疗组长瘤率和瘤重均明显小于对照组，可见其是通过增强机体免疫功能来抑制肿瘤生长，发挥抗肿瘤作用的。另外，高俊峰等在研究中药消结灵对小鼠移植实体型肝癌的抑制作用时，免疫组化染色也发现T淋巴细胞活性增强，并且枯否氏细胞功能旺盛，可分泌免疫调节因子破坏癌细胞。包旭、王耐勤等分别观察了中药制剂仁康胶囊和扶正抗癌口服液(天门冬、黄芪等)对小鼠移植性肝癌的影响，结果表明，两者除分别可明显延长腹水型肝癌小鼠生存期、抑制实体瘤生长外，还均具有显著增强单核巨噬细胞吞噬能力，增加血清溶血素含量的作用，且扶正抗癌口服液还对荷瘤小鼠脾淋巴细胞转化功能有明显促进作用(P<0.01)。 近年来，红细胞在抗肿瘤免疫中的作用越来越受到人们的重视。张天娥等通过对直向肿瘤红细胞花环实验(DTER)、促肿瘤红细胞花环实验(ETER)和协同肿瘤红细胞花环实验(ATER)的检测，发现克癌临方药治疗组荷肝癌(H22)小鼠的三个实验结果皆显著高于模型组(P<0.001)，且ETER和ATER还明显高过正常小鼠(P<0.05和P<0.001)，表明克癌临具有增强红细胞对肿瘤细胞免疫粘附和吞噬能力的作用。又如张健等观察了扶正解毒组(CM1)、活血化瘀解毒组(CM2)和扶正活血化瘀解毒组(CM3)三组中药对大鼠移植性肝癌红细胞免疫功能的影响，发现CM1、CM2两组的RBC-C3bRR高于空白组而RBC-ICR低于空白组(P<0.05或P<0.01)，且瘤体大小与红细胞免疫功能有相关性，瘤体越大，RBC-C3bRR越低，呈负相关，而RBC-ICR越高，呈正相关。 2.调节细胞因子的活性 由免疫细胞及其相关细胞产生的各种细胞因子，在机体抗肿瘤免疫效应中也起着重要的作用。潘敏求在用健脾理气、化瘀软坚、清热解毒的中药治疗小鼠移植实体型肝癌时发现，正常及荷瘤小鼠不仅巨噬细胞吞噬能力和血清溶血素含量得到提高，对干扰素也有显著的诱生作用，抑瘤率显示为35.2%～43.6%，表明健脾理气、化瘀软坚、清热解毒中药不仅有直接的抗肿瘤作用，更主要的还能增强机体免疫功能，调动机体自身的抗癌能力。闫智勇等也观察到，中药复方癌肿宁除可明显增强荷肝癌(H22)小鼠NK细胞活性外，还可显著增强其IL-2活性，与模型对照组和5-Fu治疗组相比均有非常显著性差异(P<0.05或P<0.001)。又张天娥等在研究中药复方克癌临对荷肝癌(H22)小鼠抑瘤作用时，除发现与模型组和5-Fu治疗组相比可明显增强荷瘤小鼠IL-2活性外(P<0.001)，还观察到模型组肿瘤坏死因子(TNF)水平极显著高于其它组，但瘤重却大于其它组，且体重也低于正常小鼠与克癌临治疗组，一般状态、毛泽等方面均较差，显示高水平TNF似对肿瘤有促生长和造成机体损伤的作用，而克癌临治疗组TNF水平除显著高于正常小鼠和5-Fu治疗组(P<0.05)，却极显著低于模型组(P<0.001)。表明克癌临具有抑制荷瘤小鼠TNF水平的异常增高，使其维持在一定水平发挥抗肿瘤、调节机体免疫力等积极作用。 其他方面的研究则发现，扶正抗癌汤可明显抑制裸鼠接种人肝癌细胞生长，并能使实验组血清IgG含量显著高于对照组，从而提高机体免疫力而杀伤肿瘤细胞。益气养阴方(黄芪、白术、麦冬等)对荷肝癌(HepA)小鼠的抑瘤率为53.34%，还可使小鼠生存质量明显好转，体重、胸腺重和脾脏重均增加，血浆cGMP明显降低，cAMP/cGMP明显升高(P<0.01)，表明该药的作用是通过调整环核苷酸比值，增强机体免疫力而达到促进分化和抑制肿瘤生长而实现的。 与化疗药联用的增效减毒作用 大量研究发现，中医药与化疗药物联用对克服化疗药物的耐药性、减轻毒副损伤有确切疗效。如许继平等以荷肝癌(HepA)小鼠为观察对象，发现河车大造胶囊(紫河车、熟地、天冬、牛膝等)分别与阿霉素、5-氟尿嘧啶、长春新碱、顺铂和环磷酰胺合用时，对5种化疗药物均有增效作用，合用抑瘤率分别为60.5%、72.2%、53.4%、64.8%和83.2%，同时可延长小鼠的生存率，并且河车大造胶囊在化疗期间对荷瘤小鼠造血功能(血中血红蛋白、红细胞、血小板量)、心肝肾功能(谷丙转氨酶、肌酸激酶、尿素氮检测)和小鼠免疫功能(NK细胞、T淋巴细胞转化率、免疫复合物)都有明显的保护功能。廖恒祥等用大剂量5-Fu原位肝脏隔离灌注技术行犬区域性化疗，观察静脉给药全身化疗组、区域性化疗组、区域性化疗+丹参组等不同组别的外周血细胞免疫功能的变化，结果区域性化疗组实验动物的细胞免疫功能抑制作用明显小于同等剂量的全身化疗组，而且恢复较快；而丹参组细胞免疫功能明显高于区域性化疗组(P<0.05)，表现在可显著提高T细胞、B细胞总数和吞噬细胞吞噬功能等方面，从而认为丹参对原位肝脏隔离灌注区域性化疗所致细胞免疫损害有保护作用。张英华等发现由白花蛇、干蟾、五倍子、延胡索等组成的克癌力胶囊，在剂量为10g/kg和30g/kg体重时对小鼠肝癌(H22)实体瘤的抑瘤率分别为51.47%和47.79%(均P<0.01)，并发现该药对环磷酰胺所引起的小鼠毒副作用如白细胞减少、骨髓抑制等有明显对抗作用。 翁玉芳等通过微核试验，发现中药墨旱莲不论是灌胃还是腹腔注射，均对环磷酰胺诱发小鼠骨髓多染红细胞微核有明显的抑制作用，表明墨旱莲对环磷酰胺所致骨髓染色体损伤有一定保护作用。陈志雄等观察了补肾(六味地黄汤)、健脾(四君子汤)、活血化瘀中药(丹参饮去檀香加红花)以及具有补肾、健脾、活血化瘀功效的活髓片(黄芪、黄精、川芎等)对环磷酰胺造模小鼠骨髓细胞DNA含量及细胞周期的影响，结果补肾、活血及活髓片组骨髓细胞DNA含量均有不同程度的增加，且骨髓细胞G1期细胞百分比以活髓片组为最高，G2期细胞百分比以健脾组为最高，S期细胞百分比以活血组为最高。表明活髓片与补肾、活血方具有促进骨髓抑制小鼠DNA合成的作用，且补肾、活血方还具有保护骨髓和促进骨髓细胞由G1期进入S期的作用。 防治肝癌的转移和复发 叶向荣等研究发现，艾灸移植性肝癌(H22)小鼠神阙穴后，肿瘤结节数明显较对照组少，接种的侧腋窝淋巴结和肾门淋巴结重量也明显减小，侵犯程度明显减轻。孙婧景等观察了丹参对SMMC-7721细胞株侵袭粘附能力和裸鼠人肝癌切除术后转移复发的影响。结果发现，经丹参处理的SMMC-7721细胞见粘附分子-1表达明显降低；丹参可抑制SMMC-7721细胞之间以及与淋巴细胞、内皮细胞的粘附，不但抑制了SMMC-7721细胞的侵袭能力，而且促进已粘附细胞的脱落；丹参对早期和晚期裸鼠人肝癌切除术后肝内及远处转移、复发均有防治作用。王志学等动物实验证实，消瘤平移合剂对小鼠H22肝癌 (术后 )自发性肺和淋巴结的转移率和转移程度、皮下移植瘤及肺转移瘤的生长均有显著抑制作用。另外，周延峰等研究也证实，扶正消瘤合剂可以明显抑制H22肝癌小鼠的实验性肺转移。 结语 肝癌的预防和治疗仍然是当前医学界的一大难题。中医中药无论是单味药制剂还是复方，在临床和实验研究中都显示出了较好的抗肝癌作用。其机理涉及阻断致癌剂诱变、直接杀伤或诱导肝癌细胞凋亡、抑制细胞DNA合成和阻滞细胞周期、诱导肝癌细胞分化、增强机体抗肿瘤免疫功能、防治肝癌的转移和复发以及与化疗药联用的增效减毒作用等。无疑，这些研究还不能全面揭示中药的抗肝癌机制，而且其实验结果也多是初步的，但在某些方面却显示出了其独特的优势和广阔的发展前景。诱导肿瘤细胞的凋亡与分化已成为当前治疗肿瘤的新途径，中医药在这两方面都被证明有非常诱人的潜力；调节、保护机体免疫功能，从而调动机体自身的抗癌能力，不仅可抑制肿瘤增殖，而且可提高机体整体的功能状态，从而延长生存期；无病防病、既病防变，某些中药还可抑制肝癌癌前病变而起到预防癌变的作用。另外，预防转移和复发是目前提高肝癌疗效和生存率的关键，活血化瘀中药在这方面显示出一定的作用；肝癌的综合治疗对于疗效的提高已得到学术界的广泛认同，中医中药有计划地与手术治疗、放疗、化疗相结合，可明显减少不良反应，提高远期疗效。这些，都有待从不同层次、不同侧面进行深入而广泛的研究，相信通过这些系统研究，中医药对肝癌的预防和治疗将会有新的突破。 |