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丙肝及乙肝联合基因免疫 丙肝病毒是引起输血后肝炎的主要原因，乙肝与丙肝传播途径相同，二者可重叠成混合感染，目前尚无满意治疗。本实验应用双表达载体进行了联合基因免疫研究以寻找防治HCV／HBV重叠或混合感染的、新的高效联合基因免疫策略。 本实验分别将与HCV核心区基因互补的CDNA和HBV核心区基因克隆于真核表达载体，构建pRSC－HBV／HCB，转染小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0），通过免疫荧光和Western印迹法检测蛋白的表达，用酶联免疫法、乳酸脱氢酶释放法及荷瘤试验观察小鼠体液免疫应答及细胞免疫应答。 实验结果，pRSC－HBV／HCV转染的SP2／0细胞可见HBcAg及HCV核蛋白染色阳性荧光细胞，相对分子质量1400及2100处均可见蛋白条带，Western印迹分析可见特异性的蛋白条带。10只免疫鼠中全部出现抗－HCV及抗HBV抗体，而对照组（n＝10）全为阴性。免疫组小鼠脾细胞对转染pRSC－HBV／HCV的SP2／0细胞的细胞毒活性明显高于对照组，荷瘤试验显示免疫组小鼠注射转染pRSC－HBV／HCV的SP2／0细胞后肿瘤生长缓慢。 慢性乙肝及丙肝患者体内病毒难以清除的原因之一是机体细胞免疫功能障碍，尤其是针对主要靶抗原即核抗原的特异性细胞免疫应答低下。本研究的结果提示pRSC－HBV／HCV在Ballb／c小鼠体内可同时获得对HBV核蛋白与HCV核蛋白的特异性体液免疫应答及细胞免疫应答，从而为联合基因免疫提供了新的策略和思路。 |