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桑叶延年益寿的药理学研究 1.2 动物：NIH小鼠，体重18～22g，♀♂各半；Wistar大鼠由本校实验动物中心提供。 休 闲 居 编 辑 黑腹野生型果蝇，从浙江大学生命科学院遗传室引种，繁殖供实验用。 2 方法与结果 2.1 抗应激作用 2.1.1 对小鼠耐高温能力的影响：小鼠ig给药，每天1次，用药14d后将小鼠放在恒温培养箱内，温度维持在45℃，观察死亡时间。结果桑叶8g／kg组能明显延长小鼠的耐高温时间（表1），表明桑叶能提高小鼠的耐热能力。 表1 桑叶对小鼠耐受高温能力的影响 ---------------------------------------------------------------------- 组别 剂量（g/kg） n 耐高温时间（min） ---------------------------------------------------------------------- 对照组 - 16 20.11±4.14 桑叶 2 16 22.35±4.55 4 16 20.32±1.89 8 16 24.85±5.18** ---------------------------------------------------------------------- 与对照组比较：**P＜0.01 2.1.2 对大鼠肾上腺内Vit C含量的影响：Wister大鼠，体重：♂（326.3±36.1）g，♀（228.5±33.4）g。设5组，各组每天1次ig给药，3周后将大鼠置46℃恒温培养箱内30min ，取出放血处死，取肾上腺称重，置匀浆器内制成匀浆，按方法实验，在分光光度计580nm波 长记录吸光度。根据Vit C标准曲线求各样品吸光度值所相当的肾上腺内Vit C含量。计算每 100g肾上腺所含Vit C的mg数。结果见表2，大鼠在高温刺激下引起肾上腺内Vit C含量降低，肾上腺内Vit C含量的降低反映肾上腺皮质的分泌功能低下。桑叶8g/kg能防止高温引起的肾上腺Vit C含量的降低，这表明在应激状况下，桑叶能防止由于应激反应引起的肾上腺功能低 表2 桑叶对大鼠肾上腺Vit C含量的影响 ---------------------------------------------------------------------- 组别 剂量 n 温度 肾上腺Vit C含量 （g/kg） （℃） （mg/100g肾上腺） ---------------------------------------------------------------------- 对照组 - 7 46 264.85±53.53### 桑叶 2 10 46 257.60±42.20 4 9 46 270.60±50.90 8 8 46 400.89±147.51* 室温对照组 - 9 27 454.66±49.47 ---------------------------------------------------------------------- 与室温对照组比：###P＜0.001； 与对照组比：*P＜0.05 2.1.3 对地塞米松引起小鼠"耗竭"现象的影响：取小鼠，桑叶8g／kg组每天1次ig给药，用药2周后同时每天im地塞米松15mg／kg，连用7d，将小鼠置45℃培养箱内进行高温刺激试验，然后将肾上腺取出称重。结果见表3。地塞米松对照组的小鼠肾上腺重量比桑叶组低，桑 叶组与生理盐水对照组相近，桑叶组小鼠耐高温时间延长。实验表明，注射地塞米松小鼠，一般状态较差、体重、肾上腺重量、抗热能力均低于生理盐水对照组，呈现了地塞米松引起的"耗竭"现象，桑叶能减轻这种"耗竭"现象的发生，对肾上腺衰竭具有保护作用。 表3 桑叶对地塞米松引起小鼠"耗竭"现象的影响 ----------------------------------------------------------------------- 组别 肾上腺重量 耐高温时间 体重增减数 n(♂)（mg/10g体重） n(♀♂) （min） n(♀♂) （g） ----------------------------------------------------------------------- 生理盐水-对照组 12 2.05±0.57 23 18.87±2.87 23 0.38±0.88 地塞米松-对照组 11 1.25±0.41### 24 17.41±1.64# 24 -1.57±0.96 地塞米松-桑叶组 18 2.02±0.38*** 34 19.85±2.85*** 34 -1.31±0.94 ----------------------------------------------------------------------- 与生理盐水对照组比较：#P＜0.05 ###P＜0.001； 与地塞米松对照组比较：***P＜0 .001 2.2.1 对小鼠游泳试验的影响：小鼠每天1次ig，14d后开始实验，室温（27℃），小鼠尾部加负荷2.5g／10g，以开始放入水中至死亡的时间为游泳时间。结果见表4。桑叶能延长小鼠游泳时间。 2.2.2 对小鼠转棒试验的影响：各组小鼠每天1次ig，2周后，咖啡因40mg/kg×1次sc，用ZB-Ⅰ型小鼠转棒测试机（浙江大学医学院医疗仪器厂），转速8r/min进行耐力试验。将小 鼠放置正在转动的转棒上，开始记时，观察小鼠至放上转棒到从转棒上跌下的时间。结果见 表5。桑叶能延长小鼠在转棒上的活动时间，说明桑叶能提高小鼠的耐力。 表5 桑叶对小鼠转棒试验的影响 ---------------------------------------------------------------------- 组别 剂量（g/kg） n 转棒上活动时间（s） ---------------------------------------------------------------------- 对照组 - 20 29.8±21.2 桑叶 2 20 32.5±32.9 4 19 33.0±26.2 8 19 60.4±51.4* 咖啡因 0.04 20 78.4±54.9*** ----------------------------------------------------------------------- 与对照组比：*P＜0.05 ***P＜0.001 2.3 对老年大鼠SOD和脂褐质含量的影响：老年Wistar大鼠，♂，18月龄，体重（503. 0±57.8）g，设对照组（饮水）、桑叶16，3.2g／L组，配好后代水饮，用药3个月，干饲料 同常规饲喂。青年大鼠，♂，体重（252.9±23.1）g，3月龄。取大鼠血测红细胞内SOD量。 然后，大鼠放血处死，取大脑、脊髓称重后剪碎放入冰的氯仿-甲醇（1：2）液中，置玻璃匀 浆器中制组织匀浆。匀浆液40℃温育5min，15009离心10min，上清液在F-4000荧光分光光度 计测定脂褐质含量，激发波长435nm，狭缝10nm，0.1μg/mL（0.1mol/L硫酸配制）喹宁为荧 光基准物质。结果桑叶16g/L组SOD含量明显高于老年大鼠对照组，桑叶3.2g/L组与老年大鼠 对照组比较无显著差异，老年大鼠对照组与青年对照组比较无显著差异，表明桑叶16g/L组能 提高老年大鼠红细胞内SOD量（表6）。桑叶16g／L组大脑、脊髓中脂褐质含量与对照组比较 均下降，桑叶3.2g/L组大脑中脂褐质含量与对照组比较有降低。老年大鼠对照组的大脑、脊髓中脂褐质含量比青年大鼠对照组显著增高。表明桑叶有降低老年大鼠大脑、脊髓组织脂褐质作用（表7）。 表6 桑叶对老年大鼠红细胞内SOD含量的影响 ----------------------------------------------------------------------- 组别 n SOD（U/g·Hb） ----------------------------------------------------------------------- 老年大鼠 对照组 8 783.3±42.7 桑叶（3.2g/L） 5 799.2±42.4 桑叶（16g/L） 6 898.9±41.0*** 青年大鼠 对照组 7 779.1±21.5 ----------------------------------------------------------------------- 与老年大鼠对照组比：***P＜0.001 表7 桑叶对老年大鼠大脑、脊髓组织脂褐质含量的影响 ----------------------------------------------------------------------- 组别 n 脂褐质（μg/g组织） 大脑 脊髓 ----------------------------------------------------------------------- 老年大鼠 对照组 8 1.66±0.17## 1.32±0.28### 桑叶（3.2g/L） 5 1.38±0.27* 1.02±0.20 桑叶（16g/L） 7 1.34±0.21** 1.05±0.15* 青年大鼠 对照组 7 1.27±0.30 0.81±0.16 ----------------------------------------------------------------------- 与老年大鼠对照组比：*P＜0.05 **P＜0.01 与青年大鼠对照组比：## P＜0.01 ### P＜0.001 2.4 对果蝇寿命的影响：黑腹野生型果蝇，25℃恒温生化培养箱中饲养，基础培养基：蔗糖13g，琼脂1.5g加水90mL煮沸待琼脂熔化，玉米粉17g，酵母粉1.4g加水90mL煮沸，两者合一加丙酸2mL。将含有桑叶0.1％的桑叶溶液、含有生晒参0.05％的生晒参水煎剂代替水配培养剂。成蝇用基础培养基喂养30d，再给予含有桑叶或生晒参的培养基喂养，直至死亡。桑叶对果蝇寿命的影响见表8，结果表明桑叶能延长果蝇的寿命。 表8 桑叶对果蝇寿命的影响 ----------------------------------------------------------------------- 组别 n 最高寿 最高寿命 平均寿命 平均寿命 命（d） 延长（%） （d） 延长（%） 对照组 ♀ 49 75 51.6±9.6 ♂ 51 73 60.2±9.6 0.05%生晒参 ♀ 37 77 2.6 63.1±9.7*** 22.3 ♂ 45 83 13.7 66.9±6.1### 11.1 0.1%桑叶 ♀ 40 76 1.3 58.5±10.3** 13.4 ♂ 47 78 6.8 65.6±15.9 9.0 ----------------------------------------------------------------------- 与对照组♂比：###P＜0.001 与对照组♀比：**P＜0.01 ***P＜0.001 3 讨论 研究表明桑叶能提高小鼠对高温刺激的耐受能力和防止由于应激刺激引起的大鼠肾上腺 皮质分泌功能低下，而当肾上腺功能低下时，桑叶可使之恢复正常。用地塞米松使小鼠产生 "耗竭"，桑叶则可减轻此现象的发生。桑叶能延长小鼠游泳及转棒时间，具有增强肌体耐力 作用。桑叶能延长果蝇的寿命，能提高老年大鼠红细胞内SOD含量，从而能有效地清除生物氧化产生的超氧阴离子，并能降低老年大鼠大脑、脊髓组织脂褐质含量，表明具有延缓衰老作用。另有研究表明桑叶无中枢神经系统安定作用，对免疫功能无影响，无促进生长及性激素 样作用。 在桑叶研究的基础上，组成以桑叶为主的制剂--东方至宝口服液，由桑叶、桑椹、蚕沙 等多味中药组成，药理及临床研究有较好的抗衰保健作用，以清补为其特色，尤宜于中老年 人服用，本研究为中老年保健用药和利用蚕桑药源开拓了一条新路。 |